PLAN DE AISLAMIENTO

PLAN DE AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS EN UNA MUESTRA ALMIDON DE PAPA.

OBJETIVOS:
1. Identificar medios de cultivo para el aislamiento de las posibles bacterias presentes en el almidón de papa sabanera.
2. Aislar los posibles microorganismos presentes en el almidón de papa sabanera (hongos, levaduras o bacterias).
3. Aislar microorganismos presentes en el almidón de papa sabanera por la técnica de siembra en dilución por estrías en medios de agar nutritivo y agar PDA, y obtener un cultivo exénico o puro.

MARCO TEORICO

El almidón es un polisacárido de reserva alimenticia predominante en las plantas, constituido por amilasa y amilopectina. Proporciona el 70-80% de las calorías consumidas por los humanos de todo el mundo. Tanto el almidón como los productos de la hidrólisis del almidón constituyen la mayor parte de los carbohidratos digestibles de la dieta habitual. Del mismo modo, la cantidad de almidón utilizado en la preparación de productos alimenticios, sin contar el que se encuentra presente en las harinas usadas para hacer pan y otros productos de panadería.
Caldo nutritivo: medio de cultivo utilizado para propósitos generales, para el desarrollo de microorganismos con escasos requerimientos nutricionales. Su uso esta descripto en muchos procedimientos para el análisis de alimentos, aguas y otros materiales de importancia sanitaria. Su composición es: extracto de carne (1gr/l), extracto de levadura (2gr/l), peptonas (5gr/l) y Cloruro sódico (5gr/l).

AGAR NUTRITIVO: El Agar Nutritivo es utilizado para el cultivo de una amplia variedad de microorganismos. Es utilizado para propósitos generales, para el aislamiento de microorganismos poco exigentes en lo que se refiere a requerimientos nutritivos. Su uso está descripto en muchos procedimientos para el análisis de alimentos, aguas y otros materiales de importancia sanitaria.

PDA (POTATO DEXTROSA AGAR): El medio PDA tiene en su formación dextrosa como fuente carbonada, este compuesto lo hace selectivo para hongos ya que sólo éstos pueden degradarlo, si tuviera otra fuente de carbono como glucosa también crecerían bacterias.
Para la elaboración del medio PDA, el procedimiento es mucho más sencillo puesto que ya esta comercializado en polvo y sólo es necesario disolverlo en agua destilada y agitar.


PRÁCTICA Nº 1:
9 DE AGOSTO DE 2009
PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO PARA AISLAMIENTO DE ALMIDON DE PAPA SABANERA.
En cajas de petri debidamente esterilizadas se preparan los medios de cultivo (PDA y Agar Nutritivo) para la posterior siembra, también se prepara una la solución de agua pectonada, para realizar los disoluciones correspondiente, este procedimiento se llevo a cavo utilizando medios de cultivos sólido disueltos en agua destilada y llevados al autoclave.


PDA: en un vidrio de reloj se pesa 4.60 gr. Del medio en una balanza de plato y se disuelven en un erlenmeryer con agua destilada, se calienta hasta ebullición, se adicionan en 4 cajas de petri alrededor de 20 ml del medio a cada una y se envuelve en papel Craft, se lleva al autoclave.

AGAR NUTRIVIVO: en un vidrio de reloj se pesa 2.40 gr. Del medio en una balanza de plato, se disuelve en agua destilada, y se calienta hasta ebullición, en 4 cajas de petri se adicionan alrededor de 20 ml del medio, se envuelven en papel Craft y se lleva al autoclave.

AGUA PECTONADA: se pesan 1.8 gramos de agua pectonada y se disuelven en agua destilada, se lleva al autoclave y se almacena pra realizar las destilaciones con almidón de papa sabanera.

Nota: Cada uno de estos medios preparados se debe realizar cerca del mechero y con los implementos de protección personal necesarios

PRÁCTICA Nº 2:
24 DE AGOSTO DE 2009

REALIZAR EL AISLAMIENTO DE LAS POSIBLES BACTERIAS PRESENTES EN ALMIDON DE PAPA SABANESRA Y RECUENTO E IDENTIFICACION DE COLONIAS.

Para realizar el proceso de aislamiento de bacteria de almidón de papa sabanera se requiere un cultivo, se quiero

Primero se realiza el proceso de siembra, este proceso consiste en agregar al agua pectonada previamente preparada 5 gr. de almidón de papa sabanera, se disuelve y se realizan 3 Diluciones (10-1, 10-2, 10-3), tomando 1 ml de la solución de agua pectonada inicial.
De cada una de las diluciones se siembran una muestra sobre cada uno de los medios de cultivo anteriormente preparados (Agar Nutritivo y PDA), para este procedimiento se toma un asa cargada con una muestra que contenga de una de las diluciones y van haciendo estrías sobre una placa de agar de tal manera que la muestra se distribuya sobre toda la superficie.

Dependiendo del tiempo entre generaciones, que varia según la especie, después de cierto tiempo, cada una se habrá multiplicado muchas veces, formando sobre la superficie del medio un pequeño conjunto constituido por células llamado COLONIA, que se obtiene generalmente entre 24 y 48 horas.

Después de realizar la siembra, cada uno de los medios se pone en incubadora a las temperaturas específicas por tiempos ya estipulados.

Después de que ya halla transcurrido el tiempo de incubación de los agares contenedores de las muestras de almidón de papa sabanera se realiza la identificación macroscópica y microscópica.