PLAN DE AISLAMIENTO

PLAN DE AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS EN UNA MUESTRA ALMIDON DE PAPA.

OBJETIVOS:
1. Identificar medios de cultivo para el aislamiento de las posibles bacterias presentes en el almidón de papa sabanera.
2. Aislar los posibles microorganismos presentes en el almidón de papa sabanera (hongos, levaduras o bacterias).
3. Aislar microorganismos presentes en el almidón de papa sabanera por la técnica de siembra en dilución por estrías en medios de agar nutritivo y agar PDA, y obtener un cultivo exénico o puro.

MARCO TEORICO

El almidón es un polisacárido de reserva alimenticia predominante en las plantas, constituido por amilasa y amilopectina. Proporciona el 70-80% de las calorías consumidas por los humanos de todo el mundo. Tanto el almidón como los productos de la hidrólisis del almidón constituyen la mayor parte de los carbohidratos digestibles de la dieta habitual. Del mismo modo, la cantidad de almidón utilizado en la preparación de productos alimenticios, sin contar el que se encuentra presente en las harinas usadas para hacer pan y otros productos de panadería.
Caldo nutritivo: medio de cultivo utilizado para propósitos generales, para el desarrollo de microorganismos con escasos requerimientos nutricionales. Su uso esta descripto en muchos procedimientos para el análisis de alimentos, aguas y otros materiales de importancia sanitaria. Su composición es: extracto de carne (1gr/l), extracto de levadura (2gr/l), peptonas (5gr/l) y Cloruro sódico (5gr/l).

AGAR NUTRITIVO: El Agar Nutritivo es utilizado para el cultivo de una amplia variedad de microorganismos. Es utilizado para propósitos generales, para el aislamiento de microorganismos poco exigentes en lo que se refiere a requerimientos nutritivos. Su uso está descripto en muchos procedimientos para el análisis de alimentos, aguas y otros materiales de importancia sanitaria.

PDA (POTATO DEXTROSA AGAR): El medio PDA tiene en su formación dextrosa como fuente carbonada, este compuesto lo hace selectivo para hongos ya que sólo éstos pueden degradarlo, si tuviera otra fuente de carbono como glucosa también crecerían bacterias.
Para la elaboración del medio PDA, el procedimiento es mucho más sencillo puesto que ya esta comercializado en polvo y sólo es necesario disolverlo en agua destilada y agitar.


PRÁCTICA Nº 1:
9 DE AGOSTO DE 2009
PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO PARA AISLAMIENTO DE ALMIDON DE PAPA SABANERA.
En cajas de petri debidamente esterilizadas se preparan los medios de cultivo (PDA y Agar Nutritivo) para la posterior siembra, también se prepara una la solución de agua pectonada, para realizar los disoluciones correspondiente, este procedimiento se llevo a cavo utilizando medios de cultivos sólido disueltos en agua destilada y llevados al autoclave.


PDA: en un vidrio de reloj se pesa 4.60 gr. Del medio en una balanza de plato y se disuelven en un erlenmeryer con agua destilada, se calienta hasta ebullición, se adicionan en 4 cajas de petri alrededor de 20 ml del medio a cada una y se envuelve en papel Craft, se lleva al autoclave.

AGAR NUTRIVIVO: en un vidrio de reloj se pesa 2.40 gr. Del medio en una balanza de plato, se disuelve en agua destilada, y se calienta hasta ebullición, en 4 cajas de petri se adicionan alrededor de 20 ml del medio, se envuelven en papel Craft y se lleva al autoclave.

AGUA PECTONADA: se pesan 1.8 gramos de agua pectonada y se disuelven en agua destilada, se lleva al autoclave y se almacena pra realizar las destilaciones con almidón de papa sabanera.

Nota: Cada uno de estos medios preparados se debe realizar cerca del mechero y con los implementos de protección personal necesarios

PRÁCTICA Nº 2:
24 DE AGOSTO DE 2009

REALIZAR EL AISLAMIENTO DE LAS POSIBLES BACTERIAS PRESENTES EN ALMIDON DE PAPA SABANESRA Y RECUENTO E IDENTIFICACION DE COLONIAS.

Para realizar el proceso de aislamiento de bacteria de almidón de papa sabanera se requiere un cultivo, se quiero

Primero se realiza el proceso de siembra, este proceso consiste en agregar al agua pectonada previamente preparada 5 gr. de almidón de papa sabanera, se disuelve y se realizan 3 Diluciones (10-1, 10-2, 10-3), tomando 1 ml de la solución de agua pectonada inicial.
De cada una de las diluciones se siembran una muestra sobre cada uno de los medios de cultivo anteriormente preparados (Agar Nutritivo y PDA), para este procedimiento se toma un asa cargada con una muestra que contenga de una de las diluciones y van haciendo estrías sobre una placa de agar de tal manera que la muestra se distribuya sobre toda la superficie.

Dependiendo del tiempo entre generaciones, que varia según la especie, después de cierto tiempo, cada una se habrá multiplicado muchas veces, formando sobre la superficie del medio un pequeño conjunto constituido por células llamado COLONIA, que se obtiene generalmente entre 24 y 48 horas.

Después de realizar la siembra, cada uno de los medios se pone en incubadora a las temperaturas específicas por tiempos ya estipulados.

Después de que ya halla transcurrido el tiempo de incubación de los agares contenedores de las muestras de almidón de papa sabanera se realiza la identificación macroscópica y microscópica.

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BACTERIAS INFORMACION GENERAL

Bacteria

Ciertos organismos unicelulares visibles solo a través del microscopio y que constituyen uno de los tres dominios en que se dividen los seres vivos. Carecen de núcleo diferenciado y se reproducen por división celular sencilla. Las bacterias son tan pequeñas que solo pueden observarse con ayuda de un microscopio que las amplíe al menos 500 veces su tamaño real. Algunas se hacen visibles solo si se amplían 1.000 veces. Son muy variables en cuanto al modo de obtener la energía y el alimento, y viven en casi todos los ambientes, incluido el interior de los seres humanos. Habitan en las zonas más profundas de los océanos y en el interior de las profundidades de la Tierra. Las bacterias poblaron la Tierra mucho antes de que ningún otro grupo de seres vivos la habitaran; se han encontrado restos fósiles de bacterias en rocas de hace 3.800 millones de años. Esas primeras bacterias habitaron un mundo inhóspito: carente de oxígeno para respirar, con temperaturas extremadamente elevadas y niveles altos de radiación ultravioleta procedente del Sol.

TIPOS DE BACTERIAS

Las bacterias se pueden clasificar en varios tipos en función de varios criterios: por su forma, según la estructura de la pared celular, por el comportamiento que presentan frente a una tinción específica, en función de que necesiten oxígeno para vivir o no, según sus capacidades metabólicas o fermentadoras, por su posibilidad de formar esporas resistentes cuando las condiciones son adversas, y en función de la identificación serológica de los componentes de su superficie y de sus ácidos nucleicos.

La mayoría de las bacterias presentan forma de bastón, esfera o espiral. Las bacterias con forma de bastón reciben el nombre de bacilos. Las bacterias esféricas se llaman cocos y las que presentan forma espiral o en tirabuzón se denominan espirilos. Algunas bacterias tienen formas más complejas. Las espiroquetas son un tipo de bacterias con forma espiral. Entre los cocos son muy conocidos los estreptococos y los estafilococos, bacterias causantes de enfermedades.

Las bacterias, incluidas en el reino Monera, son organismos unicelulares que carecen de una organización interna bien definida. La bacteria Leptospirilla ichterohaemorrhagiae, fotografiada aquí, presenta una estructura espiral característica, llamada espiroqueta, que es común a más de 1.600 especies de bacterias.

BACTERIAS AEROBIAS Y ANAEROBIAS

Las bacterias se pueden clasificar también en función de si necesitan oxígeno o no para sobrevivir: las aerobias precisan oxígeno mientras que las anaerobias no. Las bacterias que viven en las grietas hidrotermales son anaerobias. Muchas especies anaerobias producen intoxicaciones alimentarias.

BACTERIAS AUTÓTOTRAS Y HETEROTROFAS

Respecto a la fuente de carbono que utilizan para nutrirse, las bacterias se pueden clasificar en autótrofas y heterótrofas. Las bacterias autótrofas (producen su propio alimento), lo obtienen del dióxido de carbono (CO2). Sin embargo, la mayoría de las bacterias son heterótrofas (no producen su propio alimento) y obtienen el carbono de nutrientes orgánicos como el azúcar. Algunas especies heterótrofas sobreviven como parásitos, creciendo dentro de otros organismos y utilizando tanto los nutrientes como la maquinaria celular de la célula huésped. Algunas bacterias autótrofas, como las cianobacterias, emplean la luz solar para producir azúcares a partir de CO2. Sin embargo, otras dependen de la energía liberada por la descomposición de compuestos químicos inorgánicos, como nitratos y compuestos de azufre.

BACTERIAS GRAM POSITIVAS Y GRAM NEGATIVAS

Otro sistema de clasificación de las bacterias utiliza las diferencias en la composición de su pared celular. El empleo de una técnica llamada tinción de Gram pone de relieve estas diferencias identificando las bacterias como Gram positivas y Gram negativas. Tras la tinción, las bacterias Gram positivas retienen el tinte y se colorean de violeta, mientras que las bacterias Gram negativas liberan el tinte y se tiñen de color rosado. Las especies Gram positivas tienen paredes celulares más gruesas que las Gram negativas. El conocimiento de si una enfermedad está originada por una bacteria Gram positiva o Gram negativa ayuda al médico a prescribir el antibiótico adecuado. Este método de identificación recibe el nombre de Hans Christian Joachim Gram, el médico danés que lo desarrolló en 1884.

La tinción de Gram se utiliza para identificar bacterias tratándolas con un tinte azul y observando cómo responden a esta coloración. La forma en que se colorean los distintos tipos de células depende de las variaciones de estructura de la pared celular. Las bacterias Gram positivas, como Lactobacillus acidophilus, retienen el tinte y se colorean de azul.

Morfología bacteriana

Existen bacterias con múltiples morfologías.

Las bacterias presentan una amplia variedad de tamaños y formas. La mayoría presentan un tamaño diez veces menor que el de las células eucariotas, es decir, entre 0,5 y 5 μm. Sin embargo, algunas especies como Thiomargarita namibiensis y Epulopiscium fishelsoni llegan a alcanzar los 0,5 mm, lo cual las hace visibles al ojo desnudo.41 En el otro extremo se encuentran bacterias más pequeñas conocidas, entre las que cabe destacar las pertenecientes al género Mycoplasma, las cuales llegan a medir solo 0,3 µm, es decir, tan pequeñas como los virus más grandes.
La forma de las bacterias es muy variada y, a menudo, una misma especie adopta distintos tipos morfológicos, lo que se conoce como pleomorfismo. De todas formas, podemos distinguir tres tipos fundamentales de bacterias:

1. Coco (del griego kókkos, grano): de forma esférica.

a. Diplococo: cocos en grupos de dos.
b. Tetracoco: cocos en grupos de cuatro.
c. Estreptococo: cocos en cadenas.
d. Estafilococo: cocos en agrupaciones irregulares o en racimo.

2. Bacilo (del latín baculus, varilla): en forma de bastoncillo.

3. Formas helicoidales:
a. Vibrio: ligeramente curvados y en forma de coma, judía o cacahuete.
b. Espirilo: en forma helicoidal rígida o en forma de tirabuzón.
c. especies presentan incluso formas tetraédricas o cúbicas. Esta amplia variedad de formas es determinada en última instancia por la composición de la pared celular y el citoesqueleto, siendo de vital importancia, ya que puede influir en la capacidad de la bacteria para adquirir nutrientes, unirse a superficies o moverse en presencia de estímulos.

A continuación se citan diferentes especies con diversos patrones de asociación:

• Neisseria gonorrhoeae en forma diploide (por pares).
• Streptococcus en forma de cadenas.
• Staphylococcus en forma de racimos.
• Actinobacteria en forma de filamentos. Dichos filamentos suelen rodearse de una vaina que contiene multitud de células individuales, pudiendo llegar a ramificarse, como el género Nocardia, adquiriendo así el aspecto del micelio de un hongo.